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2結果
2.1 MEA記錄兩組犬LAA、RAA組織塊FAPD
LAA和RAA組織片FAPD的圖形類(lèi)似于正置/倒置的心房肌動(dòng)作電位圖形。對照組心臟電激動(dòng)各通道同步，連續5 min記錄，無(wú)論是LAA和RAA節律在同一只犬完全一致，節律齊，頻率(156.44±8.88)次/分左右。48 h AF組LAA組織電活動(dòng)節律絕對不齊，頻率(185.22±25.62)次/分，較對照組頻率(156.44±8.88)次/分快(P＜0.01)，RAA組織電活動(dòng)節律絕對不齊，頻率(102.39±16)次/分，較對照組(156.44±8.88)次/分頻率慢(P＜0.01)(圖4)。
圖4對照組和AF組場(chǎng)電位時(shí)程和局部放電頻率的比較Note:Compared with the control group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01
48 h AF組LAA組織電壓(458.33±26.73)μV較對照組(740.55±18.93)μV明顯降低(P＜0.01)，48 h AF組LAA組織場(chǎng)電位時(shí)程(45.28±8.59)ms較對照組(70.77±6.98)ms縮短(P＜0.01)。
48 h AF組RAA組織電壓(504.83±39.93)ms較對照組(840.56±18.93)ms明顯降低(P＜0.01)，48 h AF組RAA組織場(chǎng)電位時(shí)程(61.78±7.1)ms較對照組(75.83±7.63)ms縮短(P＜0.01)。
對照組LAA，RAA搏動(dòng)頻率一致，搏動(dòng)頻率勻齊，AF組LAA，RAA組織片搏動(dòng)頻率絕對不齊，較對照組頻率明顯增加(圖5)。
2.2 MEA記錄兩組犬LAA，RAA組織塊電激動(dòng)傳導順序
從左下至右、至右上的同步記錄心電信號中記錄到波形變化明顯的心耳肌組織塊早、中和晚的場(chǎng)電位信號，表明了電激動(dòng)的傳導順序?？梢?jiàn)對照組LAA的電激動(dòng)傳導大致從左下角向右向上緩慢而遞減傳導，電壓逐漸減小，呈梯度改變。48 h AF組LAA電激動(dòng)的場(chǎng)電位原始圖，可見(jiàn)激動(dòng)頻率明顯增加并紊亂，節律絕對不齊，場(chǎng)電位信號在傳導過(guò)程中，電壓發(fā)生明顯的改變，電壓梯度樣改變消失，呈高低不等改變，表明電激動(dòng)傳導方向不一致，電壓互相抵消導致電壓梯度樣改變消失(圖6，彩插5)。
圖5對照組和實(shí)驗組LAA和RAA放電頻率，電壓和Fpdur的比較Note:Compared with the control group，*P＜0.05，＊＊P＜0.01
圖6對照組和AF組激動(dòng)傳導順序
3討論
以往對于犬心臟電生理特性的研究，主要采用經(jīng)典的膜片鉗技術(shù)研究離子通道和離子流的特性，但其僅限于單細胞水平，無(wú)法進(jìn)行細胞與細胞之間的相互作用和聯(lián)系、心肌細胞的傳導功能活動(dòng)的調節研究，且是損傷性研究，不適于進(jìn)行長(cháng)時(shí)程監測記錄。MEA標測技術(shù)，是60位點(diǎn)同步記錄、非侵入性記錄組織動(dòng)作電位的新技術(shù)，該技術(shù)直接反映與電極接觸部位心肌細胞的電生理活動(dòng)，突破了單、雙極動(dòng)作電位記錄技術(shù)不能有效反映細胞間電信號傳導的信息的缺點(diǎn)，是一種非損傷性細胞外記錄膜電位變化的新方法，可多部位(60電極)、非損傷、長(cháng)程記錄，已廣泛用于腦切片、神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò )、神經(jīng)細胞、心肌細胞的電生理活動(dòng)的研究，突破了單、雙極動(dòng)作電位記錄技術(shù)不能有效反映細胞間電信號傳導的信息，且心臟組織片電活動(dòng)較單個(gè)心肌細胞更接近生理狀態(tài)，用這種方法研究犬心耳組織片電生理活動(dòng)及興奮的傳導，目前尚無(wú)報道。
3.1 MEA記錄對照組和AF組犬LAA和RAA場(chǎng)電位的放電頻率和節律
本研究應用MEA技術(shù)記錄離體對照組和48 h AF組犬離體LAA和RAA的FAPD的結果顯示，對照組同一只犬的離體LAA和RAA的搏動(dòng)一致。雖無(wú)肉眼可見(jiàn)的機械收縮，但可以在MEA中記錄出其組織放電，其放電頻率為(156.44±8.88)次/分，和正常雜種犬麻醉狀態(tài)下的心率相似，心律勻齊。
48 h AF組各犬LAA和RAA的心律絕對不齊，同一只犬LAA和RAA的心率也不一致，且心律絕對不齊，并發(fā)現LAA的放電頻率(185.22±25.62)次/分，RAA的放電頻率(102.39±16)次/分，LAA的放電頻率比對照組快，RAA的放電頻率比對照組慢。在體48 h AF犬模型，當高右房刺激停止后，AF立即終止，不能維持，為何將組織分別取下后，已脫離了竇房結的控制，反而自發(fā)維持AF了呢?是否由于48 h 600次/分的快速起搏造成的心耳的電重構已造成心耳內潛在起搏點(diǎn)自律性增高，紊亂，但尚未能和從高位右后上方的竇房結傳來(lái)的沖動(dòng)相抗衡，因此當起搏停止時(shí)，并未能表現出AF，而心耳部確實(shí)在高頻顫動(dòng)，而被大的向左前下的向量所抵消，致使我們未能發(fā)現?
3.2 MEA記錄AF組和對照組犬LAA和RAA場(chǎng)電位的電壓
無(wú)論是對照組還是AF組均為RAA比LAA電壓高，且AF組LAA和RAA的電壓較對照組明顯降低。鑒于在體時(shí)右耳的解剖位置靠右、后、上，右房右耳較早除極，心臟整體的除極方向和其自身除極的方向一致，在心電向量圖上也表現為環(huán)體向前向下，而在心電圖的機理上也有右房大表現為P波的電壓增高，說(shuō)明右房大小和P波呈正相關(guān)。而LAA除極方向幾乎和除極方向垂直，故其更大程度表現為時(shí)限，而不表現為電壓。正常左房除極向量方向是指向左后偏下，LAA為左右心房最終除極的部位，而心臟的整體除極方向為左前下，LAA更多反映心房最終除極時(shí)限，因此在對照組犬的LAA比RAA電壓小。而在48 h AF組，由于高右房局灶激動(dòng)，形成折返，造成左右房顫動(dòng)樣傳導，由于每個(gè)單個(gè)的折返環(huán)小，電壓低，且方向不一，在同一個(gè)方向上形成大的合力，故造成AF組LAA和RAA的較對照組電壓降低。
3.3 MEA記錄AF組和對照組犬LAA和RAA fpdur
無(wú)論是對照組還是AF組均為RAA比LAA場(chǎng)電位時(shí)程長(cháng)，且AF組的LAA和RAA場(chǎng)電位時(shí)程均較對照組明顯降低，組織的場(chǎng)電位時(shí)程和單細胞動(dòng)作電位相對應，因此場(chǎng)電位時(shí)程縮短反應組織中單個(gè)細胞的動(dòng)作電位時(shí)限縮短，在A(yíng)F動(dòng)物模型和臨床AF病人中，心房有效不應期的明顯縮短是最典型的電生理特性，MEA檢測到場(chǎng)電位時(shí)程的縮短與AF時(shí)心房肌細胞動(dòng)作電位時(shí)程及心房有效不應期電生理指標縮短具有對應性和同步性。因此我們的研究提示:MEA技術(shù)可以用于A(yíng)F后心房電重塑及心臟組織塊電激動(dòng)傳導特性的研究，可以為AF電重塑的檢測提供了新的、有效的手段。應用MEA檢測記錄組織塊電激動(dòng)傳導順序發(fā)現電激動(dòng)在傳導過(guò)程中電壓發(fā)生明顯的改變，電壓梯度減小甚至消失，呈高低不等改變，這種改變是因為電激動(dòng)在傳導過(guò)程中方向各異引起電壓相互抵消，導致電壓高低不等。由此說(shuō)明MEA技術(shù)不僅能直觀(guān)反映心肌組織塊場(chǎng)電位的改變，而且能反映心肌傳導的各向異性，是傳導異常性心律失常機制研究的可靠途徑。
快速起搏高右房48 h后使心房肌代償性肥厚、排列方向紊亂及心肌纖維化等一系列心房結構的變化—心房結構性重塑，導致心房肌電活動(dòng)局部傳導延遲和各向異性傳導，心房肌電活動(dòng)的各向異性傳導可提高AF的發(fā)生率，更易導致AF的發(fā)生。
本實(shí)驗應用的組織片多電極同步記錄及分析方法，為研究離體心臟生理和病理狀態(tài)心肌組織興奮性及傳導提供了有效的新方法，并可能為心臟的傳導異常相關(guān)的心律失常的機制研究以及藥物干預研究提供一定的方法學(xué)，特別在心房肌的電傳導上，MEA技術(shù)能直觀(guān)反映心房肌傳導的各向異性，可以作為檢測心肌傳導異質(zhì)性的可靠的、有效的檢測手段。
