1、凱氏定氮法


準備4個(gè)50mL凱氏燒瓶并標號,想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質(zhì)樣品,另外兩個(gè)燒瓶作為對照,在每個(gè)燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物,再加入濃硫酸,將4個(gè)燒瓶放到消化架上進(jìn)行消化。


消化完畢后進(jìn)行蒸餾,全部蒸餾完畢后用標準鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量,直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色,即為滴定終點(diǎn),結算出蛋白質(zhì)含量。


2、雙縮脲法


雙縮脲法是第一個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法,硫銨不干擾顯色, Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵,以及酪氨酸殘基絡(luò )合,形成紫藍色絡(luò )合物,此物在540nm波長(cháng)處有最大吸收。


利用標準蛋白溶液和雙縮脲試劑繪制標準曲線(xiàn),將待測血清與硫酸鈉在待測試管中混合,并只加入硫酸鈉不含血清的試管作對照,將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑,混合后于37℃環(huán)境中放置10分鐘,在540nm波長(cháng)進(jìn)行比色,以對照管調零,讀取吸光度值,標準曲線(xiàn)上直接查出蛋白質(zhì)含量。


3、酚試劑法


取6支試管標號,前5支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液,最后一支試管加待測蛋白質(zhì)溶液,不加標準蛋白溶液,每支試管液體總量加入蒸餾水補足而保持一致,混合均勻,在室溫下放置30分鐘,以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照,于650nm波長(cháng)處測定各管中溶液的吸光度值。